一、实验室管理规范

　　人工授精站实验室是精液检查、处理、贮存的场所，为了生产出优质的、符合输精要求的精液，一定把好质量关，保证出站的每一份精液的活力不低于70%。特对实验室日常工作做如下规定。

1 、实验室要求整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次。

2 、非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准进入实验室。

3 、所有仪器设备应在仔细阅读说明书后，由专人按操作规程使用和维护保养；特别是石英蒸馏水制造器，使用时更应有人看护，注意人身安全。

4 、各种电器设备应按其要求选择适应插座，除冰箱、精液保存箱外，一般电器要求人走断电，干燥箱无人时设定温度不应高于100℃。

5 、物品器皿的清洗消毒方法：采精器皿和精液稀释器皿，以及采精手套均采用一次性物品。

6 、稀释液的配制、精液检查、稀释、分装一定按照人工授精操作规程进行。

7 、采精室与实验室之间的传递口的两测窗只有在传递物品时才能按先后顺序开启使用。

8 、实验室地板、实验台保持干净清洁。

9 、下班离开实验室前一定检查电源、水龙头、门、窗是否关闭好，确保安全。

二、采精的操作规程（徒手采精法）           

1 、采精员一手带双层手套，另一手持37℃保温杯(内装一次性采精袋)用于收集精液。

2 、饲养员将待采精的公猪赶至采精栏，用温水（夏天用自来水）将公猪的下腹部清洗干净，再用毛巾擦干。

3 、采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮部，刺激其爬跨假台畜。

4 、公猪爬跨假台畜并逐步伸出阴茎，脱去外层手套，将公猪阴茎龟头导入空拳。               

5 、用手紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头，顺势将阴茎拉出，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可射精。                  

6 、用三层沙布过滤收集浓份精液于保温杯内的一次性采精袋内，最初射出的清亮部分，不必接取，一般情况下仅收集浓份精液；但在寒冷天气，采精时应注意采出精液的保温，可根据情况适当增大收集体积。

7 、采精过程中，注意周围环境的安静，避免影响采精的多余动作，直到公猪射精完毕之前，不可以松开采精的手。

8 、采精员应注意安全，一旦公猪出现攻击行为，采精员应立刻逃至安全角。

9 、下班之前彻底清洗采精栏。

10 、 采精期间不准殴打公猪，防止公猪出现性抑制。

11 、公猪采精调教：①后备公猪7月龄开始进行采精调教；②每次调教时间不超过15分钟；③一旦采精获得成功，分别在第2、3天再采精1次，进行巩固掌握该技术；④采精调教可采用发情母猪诱导、观摩有经验公猪采精、以发情母猪分泌物刺激等方法；⑤调教公猪要有耐心，不打骂公猪；⑥注意公猪和调教人员的安全。

 13 、采精频率：8-12月龄公猪每周1次；12-18青年公猪每2周采3次；18月龄后每周采2次。所有采精公猪即使精液不使用时，每周也应采精一次，以保持公猪性欲和精液的质量。

三、稀释液配制操作规程       

1 、为了保证质量，精液站都使用商品精液稀释剂，并将其保存在5-10℃的冰箱中，注意防水、防潮。

2 、根据当天精液生产计划，确定精液稀释液的配制量，从冰箱中取出相应的精液稀释剂，置于室温中。

3 、把一次性稀释液袋套入稀释容器中，用电子称准确称取1000ml或2000ml蒸馏水，置于35℃恒温水浴槽中加热。

4 、待蒸馏水加热到30℃时，将1：1规格使用的精液稀释剂完全倒入相应的蒸馏水中，必要时可用水冲洗精液稀释剂袋内壁。

5 、在稀释容器中放入磁力搅拌子，用磁力搅拌器搅拌30分钟，以帮助稀释剂助溶解。   

6 、将配制好的稀释液放入35℃的恒温水浴槽中，确保使用前加热到35℃。

7 、稀释液应在配制好的1小时后使用，以保证其中的PH值和渗透压以及其它离子浓度达到稳定；没有使用完的稀释液可存放入冰箱4℃保存，不超过48小时，48小时后，应在使用前加入抗生素。 

四、精液品质的检查操作规程     

 1 、精液量：以电子天平称量精液，按每克1毫升计。

 2 、颜色：正常的精液是乳白色或浅灰白，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色或黄色是混有尿液，若带有淡红色或红褐色是含有血液，这样的精液应舍弃不用。         

 3 、气味：猪精液略带腥味，如有异常气味，应废弃。

 4 、精子活力检查：活力是指呈直线运动的精子百分率，在显微镜下观察精子活力，原精一般按0-5分评分；稀释后的精液一般按0-100%评分，一般要求原精活力在2分以上可以进行稀释；稀释后精液活力在70% 以上进行分装；贮藏精液活力在60%以上使用。

 5 、精子密度：指每毫升精液中所含的精子数，是确定 稀释倍数 的重要指标。要求用专用精液密度仪测定。输精浓度过低会造成产仔数降低，浓度过高将影响到精液的保存期缩短。

 6 、精子畸形率：畸形率是指异常精子的百分率，一般要求畸形率不超过20％。畸形精子种类很多,如:巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部变曲。

 7 、按要求做好精液品质检查登记表。    

五、精液的稀释操作规程                    

 1 、精液采集后应尽快在30分钟在稀释。

 2 、未经品质检查或检查不合格（活力70%以下）的精液不能稀释。

 3 、稀释液与精液要求等温稀释,两者温差不超过1℃，即稀释液应加热至33℃-37℃,以精液温度为标准,来调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。

 4 、稀释时，将稀释液沿盛精液的杯壁缓慢加入到精液中，然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌，使之混合均匀。

 5 、如作高倍稀释时，应先进行低倍稀释（1：1-2），稍待片刻后再将余下的稀释液沿壁缓慢加入。

 6 、稀释倍数的确定：活率≥0.7的精液，一般按每个输精剂量含40亿个总精子，输精量为80-90ml确定稀释倍数，例如: 某头公猪一次采精量是200ml，活力为0.8，密度为2亿/ml，要求每个输精剂量是含40亿精子，输精量为80ml，则总精子数为200ml×2亿/ml=400亿，输精头份为400亿÷40亿=10份，加入稀释液的量为10×80ml-200ml=600ml。

 7 、稀释后要求静置片刻，再作精子活力检查，如果精子活力低于70%，不能进行分装。

六、精液的常温保存                    

1 、精液稀释后，检查精液活力，若无明显下降，按每头份80-90 ml分装。

2 、在输精袋上写清楚公猪的品种、耳号，采精日期。

3 、置于 22℃-25℃ 的室温 ( 或用几层毛巾包被好)1小时后（在炎热的夏季和寒冷的冬季，特别应注意本环节），再直接放置17℃冰箱中。

4 、保存过程中要求每12小时将精液缓慢轻柔的混匀一次，防止精子沉淀而引起死亡。

5 、每天检查精液保存箱温度并进行记录，若出现停电应全面检查贮存的精液品质。

6 、尽量减少保存精液保存箱关开次数，以免造成对精子的打击而死亡。 

七、发情鉴定技术的操作规程                    

1 、母猪发情周期平均21天（19--23天），大多数经产母猪一般在仔猪断奶后的一周内（3--7天），可再次发情排卵，配种受胎。

2 、母猪发情周期可分为发情前期、发情期、发情后期和间情期，母猪只有在发情期才允许公猪爬跨或出现“站立反应”，此行为表现可是母猪适时输精的指标。

3、各期特征，略述如下：①发情前期：母猪举动不安，外阴肿胀，并由淡黄色变为红色这种变化在后备母猪较为明显；阴道有粘液分泌，其粘度渐渐增加。在此期母猪不允许人骑在背上，平均可有2.7天，不宜输精配种。②发情期：平均约2.5天，特征为母猪阴部肿胀及红色开始减退，分泌物也变浓厚，粘度增加。此时母猪允许压背而不动，压背时，母猪双耳竖起向后，后肢紧绷。③发情后期：1-2天,发情母猪的阴部完全回复正常，不允许公猪爬跨。④间情期:13-14天，完全恢复正常状态。

4 、发情鉴定：每日最少要做两次 公猪试情 （每天上午6：30-8：30和下午16：00-17：30进行发情检查），即在安静的环境下，有公猪在旁时，压背，以观察其站立反应。试情公猪一般选用善于交谈、唾液分泌旺盛、行动缓慢的老公猪。

5 、作好发情检查的完整记录：包括发情母猪耳号、胎次、发情时间、外阴部变化、压背反应等，尤其是后备母猪的记录。   

八、 输精操作规程                   

1 、输精次数：可根据具体情况采用2次人工授精或3次人工授精。                  

2 、输精时间：①断奶后3-6天发情的经产母猪，发情出现站立反应后6-12小时进行第1次输精配种；②后备母猪和断奶后7天以上发情的经产母猪，发情出现站立反应，就进行配种（输精）。                              

 3 、精液检查：从17℃保存箱取出的精液，轻轻摇匀，滴取1滴（不能太小）置于在35℃恒温板上的载玻片上预热片刻后，再盖上盖玻片，在400倍高倍镜下检查活力，精液活力≥0.7，才可进行输精。

4 、将待配种母猪赶入 专用配种栏 ，使母猪在输精时可与隔壁栏的试情公猪鼻部接触，在母猪处于安静状态下输精。

5 、输精人员清洁双手。

6 、用干纸巾清洁母猪外阴。

7 、从密封袋中取出没受任何污染的一次性输精管（手不应接触输精管前2/3部分），在其前端凹槽涂上润滑液。

8 、将输精管45度角向上插入母猪生殖道内，输精管进入10cm左右之后，感觉到有阻力时，使输精管水平，继续缓慢用力插入，直到感觉输精管前端被锁定（轻轻回拉不动）。

9 、从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号。

10 、 缓慢摇均精液 ，用剪刀剪去精液袋管嘴，接到输精管上，使精液袋竖直向上保持精液流动畅通，开始进行输精。

11 、输精过程中，尽量避免使用用力挤压的输精办法，当输精困难时，可通过抚摸母猪的乳房或外阴、压背刺激母猪等方法，使其子宫收缩产生负压，将精液吸纳；如精液仍难以输入，可能是输精管插入子宫太靠前，这时需要将输精管倒拉回一点。

12 、输精时间最少要求3-5分钟，输完一头母猪后应在防止空气进入母猪生殖道的情况下，把输精管后端一小段折起，使其滞留在母猪生殖道内3-5分钟后，再将输精管慢慢拉出。

13 、从17℃精液保存箱中取出的精液，无需升温至37℃，摇匀后可直接输精。

14 、在寒冷环境中输精应注意温度降低。

15 、室外输精应避免阳光直射精液。

16 、经产母猪用一次性海绵头输精管，后备母猪用一次性螺旋头输精管。

17 、每头母猪在一个发情期内要求至少输精两次，两次输精时间间隔12小时左右。

18 、认真登记母猪生产卡、配种记录。